C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP )是一种发现较早的蛋白质﹐可以作为监测指标，是急性期蛋白的主要成员之一。CRP在免疫反应过程中能识别病原体和宿主受损细胞,对于CRP内化进入细胞的行为和机制还缺乏深入的研究﹐原因之一是纯化原核表达的CRP有较大难度﹐不易获得有体外活性的重组表达物。为解决这一技术难题﹐构建了EGFP荧光标记的人CRP原核表达质粒。
EGFP-CRP蛋白,通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评价。方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化,梯度透析,获得复性的His-EGFP-CRP蛋白;并用(HPCE)技术对复性的蛋白进行检测,了解蛋白质的等电点及活性。
结果:转化实验发现,该质粒pET14b/EGFP-hCRP在BL21(DE3)中能够被诱导表达;通过包涵体变性溶解,亲和色谱纯化可获得纯度较高的 EGFP-CRP蛋白;HPCE分离发现复性后的-EGFP-CRP蛋白峰为多个,其在电泳液pH值低于6时易检出,EGFP-CRP与 THP-1细胞裂解物孵育后的检测峰增多。
荧光标记链霉抗生物素蛋白
荧光标记甲藻细胞表面蛋白
荧光标记酪蛋白
荧光标记增强绿色荧光蛋白质粒pEGFP
荧光标记增强绿色荧光蛋白EGFP
荧光标记β淀粉样蛋白(Aβ)转基因细胞模型β淀粉样蛋白(Aβ)
星戈瑞荧光2022.9
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