尔云间 一个专门做科研的团队

原创 小微 A科研显微镜 关注我们

Mid-Autumn Festival

前阵子小薇通过分享文献介绍实验设计思路时，

收到不少小伙伴的问题反馈，例如：

不同蛋白表达的方法对样本有要求吗？

研究某个蛋白的功能时，需要先检测蛋白的定位，检测蛋白定位方法都有哪些呢，该如何选择？

哪种蛋白检测定量最准确？

鉴于上述问题，小薇今天特意给大家分享几种常见的蛋白检测技术的应用，希望对大家有所帮助。

蛋白免疫印迹（Western blot）

Western blot是最常用的经典蛋白分析技术。它是根据抗原抗体的特异性结合检测样品中蛋白表达的方法。Western blot检测先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上后，再利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品。

样品：细胞、蛋白。

应用：定性和半定量分析。可用于检测多种类型的蛋白，例如核蛋白，细胞质蛋白，分泌蛋白等，通过观察印迹条带有无反应蛋白的表达情况，进而对蛋白表达与否进行定性判断；而且还可以通过Image J等软件对蛋白条带进行灰度分析，进而对蛋白进行半定量分析。（各位客官可移步之前的公众号文章看看如何灰度分析——ImageJ惊艳登场！分分钟搞定WB条带灰度分析（内含免费软件包））

免疫组化（IHC）

IHC融合了组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等）和免疫学原理（抗原抗体特异性结合）。利用标记抗体经抗原抗体特异性免疫反应和化学/荧光呈色反应，对组织或细胞内的抗原进行研究。

样品：细胞或组织。

应用：定位、定性和半定量分析。定位是IHC最大的优势，该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，因此可以进行形态与功能相结合的研究。该方法要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。根据呈色有无反应蛋白的表达情况，进而对蛋白与否进行直观上的定性判断。通过对呈色区域的灰度值或面积分析，进而对蛋白进行半定量分析。（各位客官可移步之前的公众号文章看看如何进行半定量分析——SCI福利来袭！ImageJ做免疫组化定量分析，教程和插件你都值得拥有）

3、酶联免疫吸附测定（ELISA）

ELISA是一种固相酶免疫测定方法，用到了免疫学原理和化学反应显色。该方法是将已知抗原或抗体吸附在固相载体上，将酶标记于抗体或抗原。然后抗原抗体及酶结合物在固相载体上进行反应，在底物参与下检测显色反应的程度，从而对抗原或抗体进行分析。

样品：多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液。

应用：精准定量。采用已知浓度的标准品做标准曲线就可以做到绝对定量，灵敏的ELISA可以达到pg级别的蛋白检测。

总结

• Western blot是经典的蛋白半定量技术，定量比IHC更加准确；可通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，间接反映蛋白的定位，但敏感性远远低于IHC。
• IHC定位性比较强，是定位检测首选方法，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。
• ELISA方法定量最准确，一般是使用血清或者组织磨碎液，是分泌性蛋白检测首选方法之一。可以微定量分析多个样本，结果精确。

以上就是今天分享的全部内容了，看完是不是对蛋白检测方法的选择有了清晰的思路，如果看完有收获的话，辛苦转发或点个赞呗。

如果您有数据、文章质量、查重、润色等等问题……小薇都在这里等你来戳。