基因缺失一直是解开分子生物学奥秘的宝贵工具。早期的方法包括基因捕获和基因靶向，以分别随机或在特定位置破坏或删除基因。在小鼠胚胎中使用这些技术导致了小鼠基因敲除模型的产生和许多科学发现。随着新技术的出现，这些方法的功效和特异性显着提高，例如用于靶向基因缺失的规律成簇的间隔短回文重复。然而，包括不需要的脱靶基因缺失在内的一些限制阻碍了它们在该领域的广泛使用。 Cre-重组酶技术为细胞特异性基因缺失提供了额外的能力，通常被认为是金标准和首选方法。尽管这项技术具有独创性，但不同载体构建体对神经元转染和转录的功效仍然是一个关键因素。

来自加拿大曼尼托巴大学Eftekhar Eftekharpour团队认为，选择合适的动物模型是完成成功研究项目的第一步。尽管 Cre 重组酶目前是生成细胞特异性敲除或敲入小鼠模型的金标准方法，但选择驱动目标神经元亚型中基因靶向的特定因素至关重要，因为并非所有转录导致 Cre 重组的因素在不同的神经元中具有相似的功效和效率。即使使用相同的基因启动子，小鼠应变对结果的明显影响也使这进一步复杂化。可以考虑使用替代方法来诱导 Cre 重组酶活性，以减少通过培育转基因动物建立所需表型的时间。对实验结果进行详细检查的必要性是一个重要步骤，必须独立于供应商的报告来确认。评估敲低功效的筛选方法是另一个问题，必须包括免疫组织化学和蛋白质印迹。新的 RNA 测序和单细胞/细胞核测序的出现是可用于确认预期结果的其他方法。虽然在 Cre 重组酶的组合中使用荧光蛋白探针可能是一个很好的对照实验，但尚不清楚一个转录因子是否可能对不同的基因/蛋白质具有相似的转导功效。考虑这些方面可能有助于具体提高神经元敲除技术的效用。

文章在《中国神经再生研究（英文版）》杂志2023年 2 月 2 期发表。

文章来源：Shcholok T, Eftekharpour E (2023) Cre-recombinase systems for induction of neuron-specific knockout models: a guide for biomedical researchers. Neural Regen Res 18(2):273-279. doi.org/10.4103/1673-5374.346541